環境微生物的快（kuài）速測定（dìng）法

一、菌落染（rǎn）色法
在含有氧化還原顯，色試（shì）劑（jì）四唑嗡紫羅（luó）蘭等的瓊脂（zhī）平（píng）板培養基上（shàng）培養微生物，或者在普通的（de）瓊脂平板培養基上培養後，經過染色，很容易（yì）判別（bié）菌落是一（yī）種比標（biāo）準培養時間更短（duǎn）的計測菌落（luò）的方法。
微（wēi）觀染色用於對培養（yǎng）結束的膜過濾器直接滴下染色液，然後讓其（qí）幹（gàn）燥，將染成青色的菌（jun1）落拿到10～20倍的放大鏡下進（jìn）行計測。培養（yǎng）時間可以縮短到（dào）原來（lái）方法的1/4～1/2。
二、阻抗法
微生物在增殖過程中會將蛋白質、碳水（shuǐ）化合物等高分子化合物，分解（jiě）成有機酸、氨基酸等離子化合物（wù），這些離子化合物達到一定濃（nóng）度，在（zài）周圍環境中將產生微小的電（diàn）量變（biàn）化。將這個電量的變化利用電阻、導電（diàn）性或者靜電容量（liàng）這些概（gài）念檢測的方法，稱為阻抗法（fǎ）。產生電（diàn）量與開始時的細菌數、菌的增殖性成反比。因此，從預先求得的兩者（zhě）的標準曲線中可以推算出樣（yàng）品中初始的細菌數。作為（wéi）產品化的（de）係統有氣壓（或液壓）傳輸係統以及（jí）細菌計數器。
實際操作如下：往容器中添加（jiā）液體培養基和樣品，放在組成（chéng）係統（tǒng）的培養裝置中開始培（péi）養。測定機逐時的自動監測培養過程中電量的變化。
本測定方法必（bì）須培養，但它和原來計（jì）測菌（jun1）落的（de）方法相比，優點在於培養時間可以縮短。培養開始後直到結果的打印（yìn）輸出（chū）*自動化，初始（shǐ）投資高但運行費用（yòng）低。另外，通過組合選擇性培養基，可應用於檢測特定（dìng）微生物。
三、氧化電極法
氧化電極法（fǎ）是一種（zhǒng）將微生物增殖過程中的呼吸活性通過氧化電極檢（jiǎn）出的方法。與阻抗法一樣（yàng），通過（guò）自動（dòng）監測，逐時的測定隨培養進度而產生的培養基（jī）中溶解氧的濃度，直到能夠檢出（chū）呼吸活性的培養時間，從這一時間推算樣品中的（de）開始菌數。測定時，向裝有氧化極的（de）容器中添（tiān）加液體培（péi）養基和樣品，然後放在組成係統的培（péi）養裝置中開始培養，測定機自動監測培養基中溶解氧濃度的逐時（shí）變化。6h內就可（kě）以檢出105CFU/g的開（kāi）始菌（jun1）數。
四、顯色法
顯色法（fǎ）是一種通過標識色素的色調變化來檢測隨微生物代謝產生的培養基pH值的變化和CO₂生（shēng）成的方法。通過自動監測檢測出培養過程中（zhōng）標識色素的色調變化，從直（zhí）到可以檢測（cè）出色調變（biàn）化的這一段培養時間推算出樣品中的開始菌數。以培養基pH值變化為（wéi）指（zhǐ）標的維夫斯、以CO_{2生成為指標的敏化培養基/生物（wù）材料20都已產品化（huà）。
維夫斯使用容器，此容器中盛有包含標（biāo）識色素的瓊脂層與液體培養基。使用時（shí），向容器中（zhōng）添加樣品，放入組成係統（tǒng）的培（péi）養裝置中開始培養。檢出時間受開始菌數多少的影響，但如果達到106CFU，7個（gè）小時就（jiù）可以（yǐ）檢出。通過組合選擇性培養（yǎng）基（jī），也可應（yīng）用於特定（dìng）微生物的檢出。}
以上四種方法仍需培養，隻是培養時間較傳統方式縮短（duǎn），有助於改善生（shēng）物汙染（rǎn）控製的工作效率，屬於一類。以下幾種方法則無需培養（yǎng），屬於另一類環境微生物快速（sù）測定法。
五、熒光染色法
利用熒光染色劑熒光染色（sè）細胞（bāo）膜和（hé）細胞核等，使用熒光顯（xiǎn）微鏡等將細菌檢出（chū）的方法。染（rǎn）色（sè）機理不同的多種熒光染色劑，根據不同的組合也能識別出活菌和死菌。染色（sè）掃描RDI及D計（jì）數、真菌監視器掃（sǎo）描、生物絮凝等都已產品化。
染色掃描RDI在薄膜過濾（lǜ）器上過濾樣品，熒光染色阻擋在薄膜過濾器上的微生物後（hòu），再進行激光掃描。熒光染色的30min，激光掃描3min即可結束。其結果可（kě）以作為圖像表示在監測器畫（huà）麵上，也可以自動計測產生熒光的點數。D計數以（yǐ）及真菌監視器掃描是結合了熒光染色法與流體檢查計數法的方法，可以（yǐ）連續測定液態樣品。
六、LAL試驗法
LAL試驗法是利用鱟屬的血球抽出物，檢測（cè）來源於革蘭氏陰性菌的內毒素的方法。內毒素是革蘭氏陰性菌細胞（bāo）壁成分的脂（zhī）多糖，可以作為革蘭氏陰（yīn）性菌的指標。
七、SLP試驗法
SLP試驗（yàn）法是利用蠶血液成分檢出肽聚（jù）糖及β-葡聚（jù）糖（táng）的方法（fǎ）。肽聚糖是細菌的細胞壁成本，β-葡聚（jù）糖是真菌的細（xì）胞壁成分。因此，通過本試驗法能夠檢出這些微（wēi）生物。不過，每個微生物的肽聚糖及β-葡聚糖含量因菌株不同而差異很大，與LAL試驗法一樣，不能（néng）定量（liàng）微生物（wù），而且也不能識別出式來源於活菌還是死菌。
八、ATP快速測定法
ATP是高能磷酸化合（hé）物，分解時產生的能量用於細胞內各種有能量需求的反（fǎn）應。即ATP在地球（qiú）上所有活著的細胞內發揮著類似於電池的功能，它的存在成為生命活動的證據。
（1）ATP法的測定原理
ATP法是利用螢火蟲尾部發光反應的微生物測定法。來源於螢火蟲的熒光素酶催化反應，以高量子收（shōu）獲率變換（huàn）具有ATP的化學能源而發光。反（fǎn）應結果（guǒ）產生的光的數量即發光量和ATP量成正比（bǐ），通過測定發光量就可以定（dìng）量ATP。ATP不但存在於細菌（jun1）體內，而且廣泛存在遊離於細菌體外的（de）狀態。細菌外ATP是指從活細菌中溶析出來，細菌死時被逐（zhú）出，而且被包含在（zài）有機汙染中。細菌外ATP影響活菌數的測定，因此在前處理階段（duàn）必（bì）須除去。另一方麵，驗證潔淨度時，用細菌內外ATP量（liàng）的總（zǒng）和（ATP總量）為汙（wū）染指標的方法，在能夠檢出微生物及（jí）其溫床汙染兩個方（fāng）麵的意義上是合理的。ATP法（fǎ）操作（zuò）簡單且能快速得到結果。
（2）以菌體內ATP量為指標測（cè）定（dìng）活菌數
根據ATP法求活菌數時，在前處理（lǐ）階段必須除去細菌體外的ATP。除去ATP的方法有酶化分解消去法和薄膜過濾器過濾除去（qù）法。酶化法原則上能適（shì）用於各種（zhǒng）樣品，但含有高濃度的蛋（dàn）白質和脂肪的樣品，有時不能（néng）充分除去細菌體外的ATP，測（cè）試前必（bì）須確認（rèn）去除效果。而薄膜過濾器法不能用於引起堵塞的樣品，但它不僅可以除去細菌外的（de）ATP，而且（qiě）還可以除去妨礙發光反應的（de）物質，進而使微生物濃縮，有助於測（cè）試。
（3）空氣中浮遊菌數的測（cè）定
用（yòng）空（kōng）氣（qì）取樣（yàng）器（qì）將空氣中浮（fú）遊菌捕集到瓊脂培養基上進行培養之前，與原來方法相同。原來（lái）方法是培養2天後計測出（chū）現的菌落，與此相對，利用ATP法檢（jiǎn）測細菌成功的將培養時間縮短到6h。
根據NASA標準，在ISO 8級食品廠的潔淨室，取樣空氣量（liàng）為10ft³的條件下，探討與原來方法的相關性。兩測定值具有相關性，但其相關性（xìng）很小（xiǎo），隻能推算出大致的空氣中浮遊菌數。一般認為這（zhè）是由於多種微（wēi）生物浮遊於空氣中，各種微（wēi）生物增殖速度和ATP含量不同的緣（yuán）故。但（dàn）是，雖不能準確求出細菌數，也可用於判定級別等某種（zhǒng）程度上放寬範圍（wéi）的評價。