無菌室浮遊菌測試標準操作程序

1、目的：建立無（wú）菌室浮遊菌測（cè）試標準操作程序（xù），規範無菌室浮遊（yóu）菌的檢測。
2、範圍：適用於無菌室（包括潔淨工作台）浮（fú）遊菌的測試和環境驗證（zhèng）。
3、職責：QA、QC人員遵（zūn）照執行。
4、內容：
4.1 參考標準：GB/T 16293-2010
4.2 測試方法
本測試方法為計（jì）數濃度法，即通（tōng）過收集（jí）懸浮（fú）在空（kōng）氣中（zhōng）的生物（wù）性粒子於專門的培養基（選擇能證（zhèng）實（shí）其（qí）能夠支持微生物生長的培（péi）養基），經若幹時（shí）間（jiān）和適宜的生長條件讓其繁殖到（dào）可見的菌落計數，以判定該無菌室的微生物濃度。
4.3 測試儀器、輔助設備和（hé）培養基（jī）
浮遊菌采樣器、培養皿（選用與儀器相適應的培養皿）、培養基、恒（héng）溫培養箱、高壓蒸汽滅菌器。
4.4 測試狀態及測試時間
4.4.1 靜態和動態兩種狀態（tài）均可進行測（cè）試（shì），靜態測試時，室內測試人員（yuán）不得多於2人。
4.4.2 在靜態a測試（shì）時，單向流無（wú）菌室（區），測試在淨化（huà）空調係統正常（cháng）運行時間不少於10分鍾（zhōng）後開始；非單向流無菌室（區），測試在淨化空調（diào）係統正常（cháng）運行不少於30分（fèn）鍾後開始。在靜態b測試時，單向流無菌室（shì）（區），測試在（zài）生產操（cāo）作人（rén）員撤離現場並經過10分鍾（zhōng）自淨（jìng）後開始；非單向流無菌室（區），測試在生產操（cāo）作（zuò）人員（yuán）撤離現場並經過20分鍾自淨後開始。
4.5 采樣點的確定 
4.5.1 zui少采樣點數目見表1，每次zui小采樣量見表2。
表1 zui少采樣點數目 ：

表（biǎo）2 zui小采樣量：

4.5.2 采樣點（diǎn）位置布（bù）置宜力求均勻（yún），避免采樣點在局（jú）部區域過於稀疏，采樣點按照《潔淨（jìng）區環境監控管理（lǐ）規程》附件×××車間潔淨度監測采樣點布（bù）局圖的要求布置，每個采樣（yàng）點一般采（cǎi）樣一次。
4.5.3 工作區采樣點位置離地0.8m~1.5m左右（略高於工作麵），送風口測（cè）點位置離開送風麵30cm左右，可在（zài）關鍵設備或關鍵工作活動（dòng）範圍處增加測點（diǎn）。
4.6 測試準備
4.6.1 采樣器在進入被測區域前先清潔表麵，然後用75%酒精消毒一遍或存放於被測區域內，與被測試區域一起消毒（用於*無菌室的采樣器必須預（yù）先（xiān）放在被測房間內）。
4.6.2 A/B級區采用一次性培養（yǎng）皿，其它區域按無菌操作要求（qiú），在中檢室潔淨工作台上提前製備培養備用（將滅菌後的培養基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養皿每個傾注（zhù）約20ml培養基，Φ150mm培每個傾注約30ml培養基），培養皿加蓋後在室溫下放至凝固。自製（zhì）好的培養（yǎng）皿在無菌室內存放不（bú）超過48小時，2~8℃保（bǎo）存的培養皿一般不超過1周，一次性培養皿在（zài）標注的有效期內使用（yòng），過期不得使用。
4.6.3 A/B級區使用的培養皿在（zài）區域消毒前一次性傳入，隨（suí）環境一起消毒，在消毒液取（qǔ）用（yòng）間架子上暫存，在有效期內（nèi）使用。若需臨時（shí）傳入，則必須（xū）在前一天臭氧消毒前通過C級與B級傳遞窗傳入B級區（qū）進行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表（biǎo）麵也必須用75%酒精擦拭（shì）。其它區域用培養皿按物品傳入要求（qiú）當天傳入使用。
4.6.4 采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內外麵（FKC型浮遊空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。
4.6.5 測試具（jù）體操作見（jiàn）“JYQ-Ⅱ型浮遊（yóu）菌采（cǎi）樣器標準操作程序或FKC-1型浮遊空氣塵菌采樣器標準操作程序”。
4.6.6 采樣結束後，蓋上培養皿蓋子，在培養（yǎng）皿上標注所有信息（包括產品批號，放置位置等），將培養皿用適宜的方式捆紮，倒置於30~35℃恒溫（wēn）培養箱中（zhōng）培養，培（péi）養時間不少於2天。
4.6.7 培養結束後逐（zhú）個檢查培養皿，用肉眼對培養皿（mǐn）上所有的菌落直接計數、標（biāo）記，然後用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分（fèn）辨時仍以（yǐ）2個或2個以上菌落（luò）計（jì）數。
4.7 測試記錄（lù）應包含以下內容
4.7.1 被測試區域名稱、測試日期、測試依據、測試者姓名、測試儀（yí）器及測（cè）試方法的描述，測試時所采用（yòng）的狀態和室內測試人員數，采樣點數目，測試（shì）次數、采樣流量，測試結果（包括所有統計計算資（zī）料）等。
4.7.2 若為動態測試，還應記錄（lù）現場操作人員數量，現（xiàn）場設備運轉情況等。
4.8 結果計算
4.8.1 用（yòng）計數方法得出各個培養皿的菌落數。
4.8.2 每個測點的浮遊菌平均濃度計算按下式進行 。
4.9 結果（guǒ）評定（dìng）
4.9.1 每個測點的浮遊菌平均濃度必須低於所選定評定標準（zhǔn）中的界限。
4.9.2 在（zài）靜態測試時，若某測點的浮遊菌平均菌濃度（dù）超過評定標準，則應（yīng）重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。
4.9.3 若有超過規定者，必須及時與生（shēng）產部（bù）門，對該區域進行消毒或其它處理，然後（hòu）重新測（cè）試至合格。
4.10 日常監控
4.10.1 浮遊（yóu）菌日常監控設（shè）糾（jiū）偏限度和警戒限度（限度範圍及取（qǔ）樣頻次見《潔淨區環境監控管理規程（chéng）》），以保證無菌室（區）的微生物濃度受到控製，定期檢測以檢查微生物負荷以及消毒劑的效力，並作傾向分析。靜態和動態（tài）的監控都可以采用該方法。
4.10.2 對（duì）於浮遊菌的取樣頻次，如果出現下列情（qíng）況應考慮修改，在評估以下情況後，也應確定其他項（xiàng）目的檢測頻次。
——連續超過糾偏限度（dù）和警戒限度；
——停工（gōng）時間（jiān）比（bǐ）預計延長（zhǎng）；
——關鍵區域內發現有汙染存在；
——在生產期間（jiān），空（kōng）氣淨化係統進行任何重大的維修；
——日常操作記錄反映出傾向（xiàng）性的數據；
——消毒規程的改變；
——引起生物汙染的（de）事故等；
——當生產設備有重大維（wéi）修或增加設備時；
——當（dāng）無菌室（區）結構或區域分布有重大變動（dòng）時。
4.11 注意事（shì）項
4.11.1 JYQ-Ⅱ型浮（fú）遊菌采樣器經消毒後先不放入培養皿，開（kāi）啟浮遊菌（jun1）采樣器，使儀器中的殘餘消毒（dú）劑蒸發，時間不少（shǎo）於5分鍾，檢查流量並根據采樣量調整設定采樣時間。
4.11.2 單向流無菌（jun1）室（區）或送風口，采樣器采樣（yàng）口朝向（xiàng）應正對氣流方向，非單向流無菌室（區），采樣口向上。
4.11.3 測試時必須（xū）穿著與被測區域潔淨度級（jí）別（bié）要求相適應並經高壓滅（miè）菌後的無菌（jun1）服。
4.11.4 布置（zhì）采樣（yàng）點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
4.11.5 采樣結束，需用75%酒精噴射采樣器罩（zhào）子的內（nèi）壁和轉盤（FKC型浮遊空（kōng）氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護蓋）。
4.11.6 應采取一（yī）切措施防止采樣過（guò）程的汙染和其他可能對（duì）樣本（běn）的汙染。
4.11.7 每批培養基應（yīng）有對照試驗，檢（jiǎn）驗培養基本身是否汙染，可每批選定3隻培養皿作為對照培養；培養皿在用於檢測時，為避免培（péi）養皿（mǐn）運輸或（huò）搬動過（guò）程造成的影響，宜同時進行（háng）對照（zhào）試驗，每次或每個區域取1個對照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然後（hòu）與采樣後的培養皿一起放入培養箱中培養，結果應無菌落生長。
4.11.8 采樣前應仔細檢查每個培（péi）養皿的質量，如發現變質、破損或汙染的應剔除。
4.11.9 由於細菌種類繁多，差（chà）別甚大，計數時一般用透射光於於培養皿（mǐn）背麵或正麵仔細觀察（chá），不要漏計培養皿邊緣生長（zhǎng）的菌落，並須（xū）注意細菌菌落（luò）或培養基沉澱物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
4.11.10 必須定期對恒溫培養箱進行校驗。