
細胞室一般就是負責單克隆抗體、HIV、體細胞等(děng)治療製劑和(hé)診斷試劑(jì)、生產用細胞及牛血清等檢驗的實驗(yàn)室;並包括負(fù)責相應(yīng)品種國家(jiā)藥(yào)品標準、一(yī)類新藥和進口藥(yào)品標準的技術審核、複核、修訂或起草(cǎo)等;負責相(xiàng)應品種國家標(biāo)準物質的研(yán)製、標定和分發;開展相應技術方法研究及技術人(rén)員培訓。
病(bìng)理科細胞室主要服務於臨床,為臨床醫生提供及時而準確的細胞學檢查結果,它通過無創或微(wēi)創的方式,既減輕病人檢查時的痛(tòng)苦又可(kě)以獲得客觀的結果。
一、細胞室如何設置
1.無菌操作細胞室:
1)由更衣間(jiān)、緩衝間和操作間三部分組成。
2)更(gèng)衣(yī)間:位於培養室zui外部(bù),用於更換潔淨的衣帽鞋口罩(zhào)。放置消毒的(de)防護服、衣帽櫃、鞋(xié)櫃。
3)緩衝間:位於(yú)更衣間與操作間之間,目的是為了保證(zhèng)操作間的無菌(jun1)環(huán)境。放置電冰箱、液氮灌、消毒好(hǎo)的無菌物品等。
4)操作間:位於內部(bù),於無菌操作、細胞培養。放置淨化工作台及(jí)二氧化(huà)碳培養箱(xiāng),離心機,倒置顯微鏡等。
房間要求:獨立房間,按潔淨廠(chǎng)房要求建造,並需要保持空氣消毒和清潔無塵:
1)紫外線燈—產生臭氧,並且室內溫度及濕度均較高,不利於工作人員健康。
2)空氣(qì)過濾的恒溫恒濕裝置的空氣潔淨度級(jí)別如下:

注:空氣潔(jié)淨度級別表:一般普通培養室常選用100000級的。
2. 準備室:常設置(zhì)在無菌操作細胞室外部,主要進行培養液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的製備。主要設置:離心機、水浴鍋、定時鍾表、普(pǔ)通天平及日常分析處理物。
3. 洗刷消毒(dú)間:要和其他區域分開,獨立一室,主要用於各種培養器皿(mǐn)的(de)清洗、準備和消毒,常設(shè)置:烘箱、高壓蒸汽消毒鍋、去離子水或者蒸餾水處理(lǐ)器、酸缸、水槽刷子等。
二、細胞室常用的基本設備
1.儀器:
1)超淨工作台-常用側流式(垂(chuí)直流)工作台,潔淨度應達到100級。國(guó)內產品一般都可以達標。視場地大小選用一個較寬的或者多個較小(xiǎo)的。
2)顯微鏡:倒(dǎo)置熒光顯微鏡,若有條件,尚可配置帶(dài)有照相係統(tǒng)的高質量相差顯微鏡、解(jiě)剖顯微鏡、錄(lù)像係統或縮時電影拍攝裝置等,以便隨時觀察、記錄、攝影細胞生(shēng)長情況。
3)CO2培養箱:需國外產品。
4)幹(gàn)燥箱:電熱幹燥箱(xiāng)升溫較高,一般需達到(dào)160℃以(yǐ)上。國內產品可達標。
5)水純化(huà)裝置:產生去離子水,可用三蒸水替代。
6)冰箱:低溫冰(bīng)箱(-20℃)可選國內的、超(chāo)低溫冰箱(-70,80C,)需要國外產品。
7)液氮罐:國內產品可(kě)。
8)離心機:國內(nèi)產品(pǐn)可,低速離心機即可,不需(xū)要(yào)低溫(wēn)冷凍(dòng)。用於細胞沉降,高速不好。
9)精密電子天平(píng):國產即可(kě),需達(dá)到精密度:分析天平的感量為0.1mg、0.01mg和0.001mg。
10)消毒(dú)器:高壓蒸汽消毒(dú)鍋,國產。
11)濾器:用於過濾培養基,國產進口都可(kě)。
2.常用的培養器皿:
1)培養瓶:由玻璃(lí)或塑料製成(chéng)。主要用於培養、繁殖細胞。進(jìn)行培養時培養瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用於密封培養。國產培(péi)養瓶的規格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;進口培養瓶則多以底麵積(cm2)表示。
2)培養皿:由玻璃或塑料製(zhì)成,供盛取、分離、處理組織或做細胞毒性、集落形成、單細胞分離、同(tóng)位素摻入、細胞繁殖等實驗使用。常用的培養皿規格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等(děng)。
3)多孔培養板:為塑料製品。可供細胞克隆(lóng)及細胞毒性等各種檢測實(shí)驗使(shǐ)用。其優(yōu)點是節(jiē)約樣本及試劑,可同時測(cè)試大量樣本,易於進行無菌操作。培(péi)養板分為各種規格,常用的規格有:96孔、24孔(kǒng)、12孔、6孔、4孔等。
4)培養操作有關的器皿(mǐn):
a)貯液瓶:主要用(yòng)於(yú)存放或(huò)配製各種培養(yǎng)用液體如培養液、血清及試(shì)劑等。貯液瓶分為(wéi)各種不同規格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。
b)吸管:主要分為刻度(dù)吸管、無刻度吸管(guǎn)。刻(kè)度吸管主要用(yòng)於吸取(qǔ)、轉移液體,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等規格。無刻度吸管分為直(zhí)頭(tóu)吸管及彎(wān)頭吸管,除可以作吸取、轉移液體外,彎頭尖吸管還常用於吹打、混勻及傳代細胞。
c)加樣器(移液器):用於吸取、移動液體或滴加樣本。可根據需要調節(jiē)量的大小,吸量(liàng)準確(què)、方便。尤以微量加樣(yàng)器,可保證實驗樣品(或試劑(jì))含量,重複性良好。目前,可高溫消毒的(de),多通道的各類移液器可供使用者選擇,能(néng)確保加樣準確、快速、方便並且達到無菌要求。
d)其他用品(pǐn):尚有收集細胞用的離心(xīn)管,放置試劑或臨時插(chā)置吸管用的試(shì)管,裝放吸(xī)管以便消毒的玻璃或(huò)不鏽鋼容器,用於存放小件培(péi)養物品便於高壓消毒的鋁製飯盒或貯槽,套於吸管頂部的橡膠吸頭(tóu),封閉(bì)各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細胞用(yòng)的安瓿或凍存管、不同規格的注射器、燒(shāo)杯和量筒以(yǐ)及漏鬥,超淨工(gōng)作台使用的酒精燈,供實驗人員操作前清潔(jié)消毒手使用的盛(shèng)有酒精或其他消毒液的微型(xíng)噴壺等(děng)。
三、細胞室管理規章製度
細胞室是進行各種細胞培養的淨化級實驗(yàn)室,所有進入實驗室(shì)的人員都必須遵守實驗室有關的規(guī)章製度,接受實驗室管理人員的管理。
*章 總則(zé)
*條細(xì)胞(bāo)室主要由團隊內相關科研人員使用,原(yuán)則(zé)上不對外開放,其他人員如確實需使用細胞室必須預先征得實驗室負責人和(hé)細胞室負責人同意(yì)。
第二條進出細胞室實驗(yàn)需要嚴格(gé)登記。如有不符(fú)合實驗(yàn)室工作和生物安全要求的,實驗室負責(zé)人(rén)和(hé)細胞室工作人(rén)員有權責令整改。
第三條使用人員(yuán)需參加專門的細胞室使用規範培訓並(bìng)通過考核後,方可獲準進入細胞室進行實驗。嚴禁未經許可擅自進入(rù)細胞室或使用相關設備。
第四條細胞室正常(cháng)使用過程中(zhōng),人員進出應通過緩衝間和風淋間;進出實驗(yàn)室的器械和樣品需通(tōng)過傳遞窗(chuāng),嚴禁隨身帶入。實驗用品應盡量一次帶入,嚴禁將與實驗無關的(de)物品帶入實驗室,在細胞室(shì)內不得進行微生物等其它(tā)易汙染物的培養,禁止從事任何高危生化實驗。
第五條實(shí)驗人員應愛護實驗室各類儀器,按照規則使用並保持設備清潔。實驗中的(de)昂貴設備,未經(jīng)許(xǔ)可(kě)不(bú)得(dé)擅自開關。精密儀(yí)器需經(jīng)專門培訓後方能操作(zuò)未經許可不得改變設備儀器的預設參數。設備儀器出現故障或發生事故,應及時向(xiàng)實驗室負責人報告,安排專業人員進行檢修。
第(dì)二章 條例
*條 常規操作
1.穿著實驗服。實驗人員必須在細胞室緩(huǎn)衝間內(nèi)更換細胞室實驗服,嚴禁不穿實驗服(fú)或直接(jiē)穿著普通實驗室實驗服進入細胞(bāo)室。
2.穿著(zhe)拖鞋。在(zài)準備間換下自己的鞋子,盡(jìn)量避免在緩衝間走動、停留。
3.細胞室zui多可6個人同時使用。
4. 實驗過程(chéng)中嚴禁喧嘩,閑聊(liáo),反複進出(chū)細胞室。
第二(èr)條 培養(yǎng)箱(xiāng)使用規則
1. 從培養箱取放物品前,用酒精清潔雙手(或手套),盡量(liàng)縮短開(kāi)門時間和減少開門次數。
注: 培養箱中的空氣(qì)是經過過濾的潔淨空氣。長時間敞(chǎng)開或頻繁開關培養箱,容易造成汙染。
2.從培養箱(xiāng)拿取細胞時輕拿(ná)輕放,動(dòng)作迅速,隨手關緊培養箱門。未經允許,禁(jìn)止翻看、移動他人細胞或樣品,如(rú)有(yǒu)特(tè)殊需要的(de),請實驗室負責人協調。
3. 培養瓶(píng)皿放(fàng)入培養箱前,用酒精消毒表(biǎo)麵,並稍等至酒精揮發後再放入,以免培養箱內(nèi)滯留過多(duō)乙醇蒸氣(qì)。
4. 培養箱內細胞培養的放置需整潔有序,方便查(chá)找,同時應盡量提高培養箱的使用效率,負責老師可視實驗情況啟用或停止空培養(yǎng)箱的(de)使用,節約資源。
5. 普通培養中的細胞,若非實(shí)驗特(tè)殊需要,每瓶/板細胞每天隻需要觀察(chá)生長狀態一次,2人以上共用的細胞,可約好時間一起觀察。
注:頻繁(fán)將細胞拿出觀察(chá),容易給培養箱(xiāng)造成(chéng)汙染,同時也會影響(xiǎng)細胞生長條件的恒定(dìng)。
6.原代細胞需放置在原代培養(yǎng)培養箱培養,不得放置於其他培養箱(xiāng),如一段時間內無原代細胞實驗(yàn),負責人可協調安排培養箱供其他細胞培養使用。
7.實驗人(rén)員應經常注意檢查培(péi)養箱溫度、CO2氣(qì)體(tǐ)量是否相符設定值(zhí)。密切注意培養箱內(nèi)的增(zēng)濕(shī)盤,定期更換無菌水並進行消毒。密切注意培養箱內(nèi)情況,如出現黴變、菌斑、支原體和衣原體(tǐ)感(gǎn)染(rǎn)或(huò)其他明顯染(rǎn)菌跡象,應立即通知管理員及其它使用者(zhě)。
第三條(tiáo) 顯微鏡使用規則(zé)
1.倒置相差顯(xiǎn)微鏡使用前,用酒精棉從中間至周圍(wéi)擦拭載物台。
2.離開細(xì)胞室時或(huò)較長時間不需使用時,及時關上電源,延長燈泡壽命(mìng)。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。
3.一次(cì)細胞實驗使用完(wán)畢後(hòu),在顯微鏡使用記錄本上登記(jì)。
4.熒光顯微鏡屬於貴(guì)重儀器需遵循貴重(chóng)儀器預約使用規程(chéng)。
第四條 超淨(jìng)台相關操作規則
1.超淨(jìng)台使用遵循預約(yuē)原(yuán)則。在細胞室入口處預約,細(xì)胞室內填寫使用登記。
a:無預約者(zhě)若有必要在他人預約時段內使(shǐ)用,需先征得預約者的(de)同意,否則應無條(tiáo)件讓(ràng)出工作台,以免耽誤他(tā)人實驗。
b:使(shǐ)用記號(hào)筆在預約表(biǎo)格上提前預(yù)約下一周的使用時間,請注意周六周(zhōu)日是指上周的周末。
c:預約內容請包括:時間(jiān)範圍,姓名,如特殊實驗(yàn)請寫明。
2.超淨台使用前用紫外燈照射15分鍾滅(miè)菌,使(shǐ)用前、後需用酒精棉球擦拭工作區消毒(dú),所有物(wù)品放入超(chāo)淨台(tái)內使用(yòng)前均應消毒,超(chāo)淨台內嚴禁堆放過(guò)多物品影響風路平衡,不同超淨台內物品嚴禁頻繁交換使用。
3.點燃酒精燈前需檢查瓶中酒精是否足夠,液(yè)麵應占瓶(píng)高1/3-2/3。
注: 消毒用75%的酒精(jīng),酒(jiǔ)精燈用(yòng)95%以上的酒精,向噴壺或燈內添加酒精時請留(liú)意。
4.超淨台中應擺放廢液杯,用於暫時存放廢棄物,實驗結束(shù)後將杯內加入NaOH溶液處理片刻,廢液垃圾倒入水池並同時(shí)用水衝釋,固體垃圾倒入生物樣品垃圾桶中。
注: 廢(fèi)液缸應及時處理(lǐ),嚴禁長時間放置,以免留有大量培養液滋生細菌。
5.細胞實驗後任何含有細胞培養汙物的培養瓶,離心管,移液管等必須及時帶(dài)出細胞房。
第五條 器(qì)具的清洗規(guī)則(zé)
1.可回收的移液管、離心(xīn)管、培養瓶皿等,放入裝有清水的塑料桶中浸泡(pào),桶內需有足量的清水以沒過浸泡物品。
注: 可回收器皿必要時先初步涮洗後再放(fàng)入(rù)桶內,尤其是培養瓶或血清管(guǎn)中有大量高營養的液體殘留時(shí),容易使桶內的清水長菌。保證浸泡的瓶、管內*被清水充滿,而不是在裝(zhuāng)有(yǒu)大量空氣的情(qíng)況(kuàng)下被(bèi)壓倒桶底。
2.清水衝洗後及時放入酸缸浸泡,應由使用者本人及時清洗晾幹備用,操作時請注意帶(dài)橡膠手套,小心操作。
注: 禁止長時間浸泡於清水中,此時細菌可能已在桶中(zhōng)生長並釋放內毒素。細菌內毒素很難通過常規濕熱滅菌(jun1)步驟去除幹(gàn)淨,即使幹烤也不能保證其*失活。內毒素對細胞(bāo)生長及多種實驗均有較大影響。
洗滌程(chéng)序:清水衝十次(cì)以上去除重金屬殘留,然後衝去離(lí)子水5次,再用超純水5次,倒置於烘箱中晾幹。並(bìng)及(jí)時包紮滅菌。
第六條 冰箱、試劑等相關操作規則(zé)
1.從冰箱取放物品(pǐn)動作要迅速(sù),關門(mén)時要檢查門是否(fǒu)關好。按類別存放試劑。嚴禁長時間敞開冰箱門。
2.各人存放於(yú)冰箱內的(de)培養液、生化試劑、樣品要注(zhù)明姓名、配製日期、樣品名稱,特殊試劑需獲得細胞室管理人員同意後方能放置。不得使用他(tā)人的培養液或其他生化試劑。
3.分裝(zhuāng)好的血清長(zhǎng)時間保存(cún)於(yú)-80℃,使用(yòng)前放(fàng)於(yú)4℃預解凍。原則上解(jiě)凍好的(de)血清應全部配成含血清的培養基備用,若有剩餘(yú),則暫存於4℃並盡快使用。盡(jìn)量不要使(shǐ)用他人開過的血清(qīng),以免交叉汙染。
4.細胞室內的冰箱空(kōng)間有限(xiàn),盡量僅放置使用頻率較高的(de)試劑。請勿將一些閑置試劑,汙染試劑長期放置在細胞室。
5.工作人員會定期對冰箱進行清(qīng)理,發現無(wú)標記,過期試劑等違規物品將全部清除出去,並且查找試劑配(pèi)置人給予警告。
第七條 進(jìn)入細胞室物品控製(zhì)
1.所有進(jìn)入細胞室的物品(pǐn)需經過傳遞窗,盡量經過紫外照射,酒精表麵消毒。
2.嚴禁將可能含有汙(wū)染物或病原菌的實驗物品帶(dài)入細胞室。
3.細胞室內(nèi)僅放置少量實驗必須耗材即可,不得整(zhěng)箱搬入,出現潔淨室內(nèi)物品(pǐn)堆積狀(zhuàng)況。
4.細胞室內儲物櫃的物品放置由相關管理人(rén)員安(ān)排,並做標記。
第八條(tiáo) 細(xì)胞室清潔守則
1.每(měi)周值日(rì)生時間從周六開(kāi)始,至下周五結束。
2.日常維護:注意培養箱顯(xiǎn)示正常,顯微鏡,冰箱(xiāng),超淨台的正(zhèng)常使用與維護。細胞室內以(yǐ)及門口生物樣品垃(lā)圾桶(tǒng)的(de)及時清理。
3.每周大清潔:每周五下午五點用新潔爾滅打掃細胞室。
清潔順序:擦超淨台(用酒精棉球);用新潔爾滅(miè)擦桌麵,培(péi)養箱,超淨台以及冰(bīng)箱外壁,及桌上的儀(yí)器,細胞室牆麵(miàn),傳遞窗,風淋室;給水浴鍋加水或換水(shuǐ),細(xì)胞室衣櫃和(hé)拖鞋擺放整齊,拖地,紫外消毒細胞室30分鍾。
注:若上周值日生及(jí)時給培養箱內水槽加足水,根據經(jīng)驗未來一周內培養箱不會幹水,但值日生仍應經常(cháng)檢查,以便及(jí)時發現異常情況。切記給(gěi)培養箱加滅菌水(shuǐ)。
4.在沒有出現問(wèn)題的情況下,每2個月清潔一次培養箱:先將培養箱中的物(wù)品取出暫存於超淨台內,對(duì)於比較敏(mǐn)感的細胞可以暫存於(yú)另一個培(péi)養箱;將培養(yǎng)箱內(nèi)的不鏽鋼板取出(chū),包括4塊橫板和左右2塊立著的架子,用酒精棉球清(qīng)潔(jié)鋼板和培養箱內壁;啟動培(péi)養箱自消程序。
第九條 人員培訓
1.由將要做細胞實驗的人員提出申(shēn)請,填寫細胞室(shì)使用(yòng)申請(qǐng)表(biǎo)。
2.細(xì)胞(bāo)室負責老師視申請人數酌情安(ān)排培訓時間,培訓內(nèi)容包括安全培訓、理論知識(shí)與實踐操(cāo)作培訓。
3.培訓考核合格後由導師、培訓老師、細胞室(shì)負責人(rén)簽字確認授予其細胞室使用權限(xiàn)。
4.培訓不合格者重(chóng)新參加培訓。
第(dì)十條(tiáo) 製度的實施與處罰
1.細胞室負責人以及(jí)管理人員密切關注細胞室的使用情況,發現(xiàn)違反(fǎn)規(guī)章操作者首先給予提醒,但須做記錄。
2.對於一周內違反(fǎn)3次以內者予以警告,3-5次者給予(yǔ)停止細胞室(shì)使用權限2周,超過5次者停用其對細(xì)胞室使用權(quán)限,需重新參加培訓後才能再次使用。
第三章 附則
本規章製度從公布之日起開始執行,由生物醫學工程(chéng)團隊實驗室管理委員會負(fù)責解釋及更正。本實驗室追求不斷地進步,各位老師(shī)及使(shǐ)用人員若有(yǒu)良好的建議可(kě)與細胞室負責人或實驗室管理委(wěi)員會(huì)成(chéng)員溝通,我們會及時協調,旨在為團(tuán)隊提供和諧,的實驗條件。